Расшифровка ПЦР анализа кала на энтеровирусы

Алексеев Андрей Викторович
Алексеев Андрей Викторович Врач лабораторной диагностики,

ПЦР анализ кала на энтеровирусы

Анализ кала при помощи метода ПЦР предоставляет возможность выявить поражение организма энтеровирусами и провести диагностику связанных с ними инфекционных заболеваний. Метод ПЦР дает возможность обнаружить патологический процесс на ранних стадиях развития, что отличает его от методов серологической диагностики. С использованием последних, достоверное установление диагноза становится возможным только через не менее две недели после инфицирования.

Что такое энтеровирусы

Расшифровка ПЦР анализа кала на энтеровирусыЭнтеровирусы представляют собой группу вирусов с РНК, обладающих нуклеокапсидом в форме многогранника и лишенных внешней оболочки. Эти инфекционные агенты принадлежат к семейству Picornaviridae, которое также включает в себя патоген вирусного гепатита А и риновирус.

Группа вирусов Enterovirus включает в себя множество разнообразных возбудителей, ответственных за широкий спектр заболеваний человека. Кроме того, в состав этой группы входят редкие виды вирусов, вызывающие болезни, которые также оказывают воздействие на организм человека. У всех вирусов из семейства Enterovirus имеется общий сценарий развития заболевания: патоген проникает через пищеварительного тракта, передаваемый путем фекально-орального контакта. После этого вирус начинает размножаться в эпителиоцитах слизистой оболочки пищеварительного тракта, и, в последствии, распространяется по всему организму через кровь, воздействуя на различные органы и ткани. Чаще всего острая инфекция протекает без симптомов или в мягкой форме, и клинические проявления болезни становятся заметными лишь после определенного периода с момента первичного заражения. Эти особенности следует учитывать при определении биоматериала, направляемого на проведение анализа.

Основанный на непосредственной идентификации РНК вируса, метод ПЦР способен выявлять энтеровирус на ранних этапах заболевания. Этот метод выделяется своей высокой эффективностью по сравнению с серологическими (косвенными) методами, которые требуют до трех недель для оценки изменений уровня обнаруживаемых специфических антител.  Однако из-за этого свойства ПЦР неспособна отличить острую энтеровирусную инфекцию от её хронической формы.

Благодаря применению полимеразной цепной реакции (ПЦР), которая способна выявлять универсальный фрагмент РНК, характерный для всех энтеровирусов, данная методика позволяет обнаруживать присутствие любого представителя этой группы.

В настоящий момент имеющиеся серологические методы обнаруживают всего лишь 12 из более чем 69 вирусов, относящихся к роду энтеровирусов. Однако из-за этой же особенности метода ПЦР невозможно провести различение между разными вирусами рода Enterovirus, что имеет важное значение при дифференциальной диагностике поражения нервной системы, связанного с Enterovirus 71, и Coxsackievirus типа A16.

Когда назначается исследование

Исследование наличия РНК энтеровируса выполняется при обнаружении следующих клинических признаков:

  • признаки герпетической ангины включают в себя: повышение температуры, мигрень, чувство тошноты, рвота, признаки лимфаденита в области шеи, появление высыпаний на слизистой оболочке миндалин, мягкого и твердого неба, а также болевые ощущения при глотании;
  • симптомы вирусной экзантемы (сыпи) на коже у детей, включая гипертермию, влажный кашель, появление папул и пустул на конечностях, а также на слизистой оболочке рта;
  • признаки инфекций пищевого отдела пищеварительного тракта.

Когда назначается исследованиеНеобходимо учесть эпидемиологические аспекты, такие как: плавание в фонтанах и стоячих теплых водоемах, взаимодействие с лицами, страдающими от заболеваний, и пребывание в областях с большой концентрацией людей.

Подготовка к проведению исследования:

  1. за три дня до сбора биоматериала рекомендуется прекратить использование свечей и слабительных препаратов;
  2. избегайте использования медикаментов, которые включают в себя белладонну, поскольку они могут оказывать воздействие на двигательную активность кишечника;
  3. исключите возможность попадания загрязнений, крови или других биологических веществ в кал;
  4. не рекомендуется проведение клизмы, включая введение каких-либо ослабляющих медикаментов во время процесса сбора материала для проведения анализов;
  5. идеально прекратить прием всех необходимых для жизни медикаментов и препаратов за сутки до проведения исследования.

Обычно сбор материала происходит после естественного процесса дефекации без применения клизм и слабительных. Используется одноразовый стерильный контейнер с широким горлышком, который следует наполнять не более чем на треть. Лаборатория предоставляет свою собственную чистую емкость. Рекомендуется избегать контакта мочи, вагинальных выделений или крови с образцами, поэтому необходимо воздерживаться от прохождения анализов во время менструации, воспалительных заболеваний репродуктивных органов. Для проведения ПЦР необходимо собирать биоматериал в период наивысших клинических проявлений инфекции. Рекомендуется применять однократную стерильную лопатку при сборе. Желательно избегать сбора фекалий напрямую из унитаза, поскольку это общедоступное пространство, и дезинфицирующие средства могут вызвать разрушение вирусной РНК.

При необходимости, можно хранить контейнер с фекалиями в холодильной камере не дольше 6 часов. Запрещено помещать его в морозильную камеру, а также использовать хладоэлементы при транспортировке материала. Установлены четкие требования к срокам поставки материала для последующего исследования в медицинской лаборатории. Желательно, чтобы этот период не превышал 1,5 часов. Для перевозки в условия жаркого сезона применяется термосумка, в другие времена возможна доставка в удобной емкости, свободной от посторонних предметов и жидкостей. В термосумке не должно присутствовать замороженных элементов или бутылок с льдом, а также не рекомендуется подвергать замораживанию материал для проведения анализов.

Результаты исследования и их интерпретация

Результаты ПЦР анализа обычно представлены в виде наличия или отсутствия детекции генетического материала энтеровирусов. Расшифровка результатов может выглядеть следующим образом:

  1. положительный результат (Positive): это означает, что в образце каловых масс был выявлен генетический материал энтеровирусов.
  2. отрицательный результат (Negative): генетический материал энтеровирусов не был обнаружен в образце кала. В данном случае, отсутствие детекции может свидетельствовать о отсутствии текущей инфекции.

Интерпретация результатов должна проводиться врачом, учитывая клинические симптомы и анамнез пациента. Положительный результат не всегда означает клиническую болезнь, так как некоторые люди могут быть носителями вируса без симптомов. Важно учитывать контекст и дополнительные данные для правильной диагностики и лечения.

Результаты исследования и их интерпретацияОсновной принцип функционирования полимеразной цепной реакции (ПЦР) заключается в специфическом увеличении и выявлении определенного участка генетического материала. Обнаружение РНК энтеровирусов начинается с первого этапа - извлечения и очистки РНК из образца каловых масс. После этого происходит обратное транскрибирование РНК с использованием ферментов обратной транскриптазы для формирования комплементарной ДНК. После этого, с применением специализированных праймеров, происходит увеличение выбранного участка РНК энтеровируса с использованием фермента - полимеразы. Для окончательной оценки генетического фрагмента используются электрофорез или другие методы с целью выявления присутствия энтеровируса.

Технология полимеразной цепной реакции (ПЦР) для выявления генетического материала энтеровируса обладает высокой точностью и чувствительностью, что позволяет обнаруживать наличие вируса даже при низких концентрациях РНК в биоматериале. Кроме того, применение ПЦР обеспечивает быстрое и эффективное анализирование больших объемов образцов, что делает ее удобным инструментом для выявления энтеровирусных инфекций. Этот подход также может успешно использоваться для изучения разнообразных штаммов энтеровируса и анализа их генетических изменений.

Для проверки эффективности лечения рекомендуется проводить анализ кала на наличие энтеровируса не ранее чем через месяц после окончания курса, поскольку вирусная РНК может сохраняться в кишечнике в течение продолжительного времени.